SUDAN III - читать гистологам

[Kvaker]

Добрый день, обращаюсь к гистологам.

Раньше мы готовили ацетоновый судан из порошка 30-ти летней давности (50 мл. 70% спирта + 50 мл. ацетона) +0,5 г. Судана - готово через 3 дня. Порошок закончился.....

Получили новый порошок судана, а он не красит по ацетоновой технологии.

Кто пробовал приготовить насыщеный р-ор на 70% спирте? (0,3 г. судана на 100 мл. 70% спирта кипятить в водяной бане)

Кто и как готовит Судан? Какие результаты лучше?

 

поделитесь опытом

 

кстати - готовый (покупной) р-ор тоже не красит как надо....

[Aklim]

Мы пользуемся суданом 3 на 70% спирту.

Со слов лаборанта есть несколько тонкостей, например плотность раствора судана и плотность спирта для промывки должны быть одинаковыми, иначе клеточные структуры будут лопаться.

как готовить раствор судана в литературе по гист. технике достаточно подробно описано. например Г.А. Меркулов " Курс патогистологической техники"Ленинград 1961. ст194.

Несколько методов из методичке из нашей республики"

"МЕТОДИКА ОКРАСКИ СУДАНОМ III (IV)

 

 

I.ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

35]

·

Выявление жиров и липидов

 

 

II. ПЕРЕЧЕНЬ РЕАГЕНТОВ

35]

Ø

Судан

III (IV)

35]

Ø

Гематоксилин

35]

Ø

Спирт этиловый 50 – 70%

35]

Ø

Квасцы алюмо-калиевые

35]

Ø

Гематоксилин

35]

Ø

Глицерин

35]

Ø

Калий йодноватокислый

35]

Ø

Глицерин – желатина

35]

 

 

III. Приготовление РАСТВОРОВ красителей

05]

1. НАСЫЩЕННЫЙ РАСТВОР СУДАНА

III (

IV)

 

 

– судан III(IV) 0,2 – 0,3 г;

– спирт этиловый 70% 100,0 мл;

помещают в термостат на 3-5 часов при t 50-60⁰;

охлаждают, фильтруют.

05]

05]

2. ГЛИЦЕРИН – ЖЕЛАТИНА

 

 

– желатина 1 часть;

– вода дистиллированная 6 частей;

набухает 1-2 часа;

– чистый глицерин 6 частей;

– фенол 0,1 часть;

растворяют при нагревании, не доводя до кипения.

 

IV. ИЗГОТОВЛЕНИЕ СРЕЗОВ НА ЗАМОРАЖИВАЮЩЕМ МИКРОТОМЕ

 

V. МЕТОДИКА ОКРАСКИ

Этапы

 

Красители

 

Время

 

1

 

 

 

Вода водопроводная

1 – 2 мин

 

2

 

 

 

СПИРТ ЭТИЛОВЫЙ50 - 70 %

1 мин

 

3

 

 

 

СУДАНIII (IV)

20 – 30 мин

 

4

 

 

 

СПИРТ ЭТИЛОВЫЙ50 - 70 %

1 мин

 

5

 

 

 

Вода водопроводная

10 – 30 мин

 

6

 

 

 

ГЕМАТОКСИЛИН

3 мин

 

7

 

 

 

Вода водопроводная

3 –5 мин

 

8

 

 

 

ЗАКЛЮЧЕНИЕ В ГЛИЦЕРИН–ЖЕЛАТИНУ

 

VI. РЕЗУЛЬТАТ ОКРАСКИ

35]

·

Жир и жироподобные вещества – от оранжевого до оранжево-красного цвета.

35]

·

Ядра клеток – синего цвета.

 

 

МЕТОДИКА ОКРАСКИ СУДАНОМ III (IV)

(по Гольдману)

 

 

 

I.ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

35]

·

Выявление жиров и липидов

 

 

II. ПЕРЕЧЕНЬ РЕАГЕНТОВ

35]

Ø

Судан

III (IV)

35]

Ø

Альфа-нафтол

35]

Ø

Гематоксилин

35]

Ø

Спирт этиловый 96%

35]

Ø

К

васцы алюмо-калиевые

35]

Ø

Гематоксилин

35]

Ø

Глицерин

35]

Ø

Калий йодноватокислый

35]

Ø

Глицерин – желатина

35]

 

 

III. Приготовление РАСТВОРОВ красителей

 

1. СУДАНIII (IV)

– судан III (IV) 0,5 – 0,6 г;

– альфа-нафтол 1,2 г;

– спирт этиловый 96% 70,0 мл;

– вода дистиллированная 50,0 мл;

кипятят через асбестовую пластинку или на водяной бане 3-5 мин;

приготовленный раствор – опалесцирующая или мутная жидкость от карминово – до оранжево-красного цвета.

2. ГЛИЦЕРИН – ЖЕЛАТИНА

– желатина 1 часть;

– вода дистиллированная 6 частей;

набухает 1-2 часа;

– чистый глицерин 6 частей;

– фенол 0,1 часть;

растворяют при нагревании, не доводя до кипения.

 

IV. ИЗГОТОВЛЕНИЕ СРЕЗОВ НА ЗАМОРАЖИВАЮЩЕМ МИКРОТОМЕ

 

V. МЕТОДИКА ОКРАСКИ

Этапы

 

Красители

 

Время

 

1

 

 

 

Вода водопроводная

1 – 2 мин

 

2

 

 

 

СПИРТ ЭТИЛОВЫЙ50 - 70 %

1 мин

 

3

 

 

 

СУДАНIII (IV)

20 – 30 мин

 

 

 

1

 

2

 

3

 

4

 

 

 

СПИРТ ЭТИЛОВЫЙ50 - 70 %

1 мин

 

5

 

 

 

Вода водопроводная

10 – 30 мин

 

6

 

 

 

ГЕМАТОКСИЛИН

3 мин

 

7

 

 

 

Вода водопроводная

3 –5 мин

 

8

 

 

 

ЗАКЛЮЧЕНИЕ В ГЛИЦЕРИН–ЖЕЛАТИНУ

 

 

 

VI. РЕЗУЛЬТАТ ОКРАСКИ

35]

·

Жир и жироподобные вещества – от оранжевого до оранжево-красного цвета.

· ядра клеток – синего цвета.

МЕТОДИКА ОКРАСКИ

СУДАНОМ ЧЕРНЫМ «В»

 

 

I.ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

525]

·

Выявление жиров и липидов

525]

·

Выявление фосфолипидов

 

 

II. ПЕРЕЧЕНЬ РЕАГЕНТОВ

Ø

Судан черный «В»

Ø

Кармин

Ø

Спирт этиловый 50 – 70%

Ø

Квасцы калийные или аммиачные

Ø

Глицерин – желатина

325]

 

 

III. Приготовление РАСТВОРОВ красителей

075]

1. СУДАН ЧЕРНЫЙ «В»

 

 

– судан черный «В» 0,1- 0,2 г

– спирт этиловый 70% 100,0 мл;

нагревают до кипения, охлаждают, фильтруют.

 

2. КАРМИН КВАСЦОВЫЙ

– квасцы калийные или аммиачные 5,0 г;

– вода дистиллированная 100,0 мл;

– кармин 1,0 г;

кипятят в колбе через асбестовую пластинку 20-30 мин;

охлаждают, фильтруют.

05]

05]

3. ГЛИЦЕРИН – ЖЕЛАТИНА

 

 

– желатина 1 часть;

– вода дистиллированная 6 частей;

набухает 1-2 часа;

– чистый глицерин 6 частей;

– фенол 0,1 часть;

растворяют при нагревании, не доводя до кипения.

 

IV. ИГОТОВЛЕНИЕ СРЕЗОВ НА ЗАМОРАЖИВАЮЩЕМ МИКРОТОМЕ

 

V. МЕТОДИКА ОКРАСКИ

Этапы

 

Красители

 

Время

 

1

 

 

 

Вода водопроводная

1 – 2 мин

 

2

 

 

 

СПИРТ ЭТИЛОВЫЙ50 - 70 %

0,5 – 1 мин

 

3

 

 

 

СУДАН ЧЕРНЫЙ «В»

5 – 30 мин

 

1

 

2

 

3

 

4

 

 

 

СПИРТ ЭТИЛОВЫЙ50 - 70 %

0,5 – 1 мин

 

5

 

 

 

Вода водопроводная

10 – 20 мин

 

6

 

 

 

КАРМИН КВАСЦОВЫЙ

5 мин

 

7

 

 

 

Вода водопроводная

5 – 10 мин

 

8

 

ЗАКЛЮЧЕНИЕ В ГЛИЦЕРИН–ЖЕЛАТИНУ

 

 

 

 

 

VI. РЕЗУЛЬТАТ ОКРАСКИ

6]

·

Жир и жироподобные вещества – темно-синего или черного цвета.

575]

[Kvaker]

Спасибо!