Метод окраски

[dospan]

Методики окраски с картинками. Картинки правда не оч. хорошего качества.

ссылка

[Ciacona]

Методики окраски с картинками. Картинки правда не оч. хорошего качества.

ссылка

 

О! Надо же: они выпустили новый буклет!

У меня где-то старый валяется - так там некоторые картинки выдают до того лажевую окраску, что только туши свет и убивайся веником!

[Ледигист]

Ну че сказать - идея буклета прекрасная, а вот, если бы не видела некоторых красок т.с." живьем" и мне показали бы только картинку - ну ни в жисть не распознала бы... У меня ван Гизон, Рего, Бест на гликоген, судан 3 на жир и Вейгерт на эластику - делаются каждый день! Это НЕ проблема ни для бюро, ни технически для лаборантов....

Согласна с коллегой, что качество картинок буклета оставляет желать!!

Трудное это дело передать в картинках истинные цвета микроскопические...

 

dospan - за ссылку спасибо! Надо же гистологу знать, что есть попытки сделать буклеты...

[Andrey]

Трудное это дело передать в картинках истинные цвета...

Не труднее, чем передавать цвета вообще. А гистологические цвета, наверное еще проще. Было бы чем сфоткать, остальное - мелочь!

[Ciacona]

Вейгерт на эластику - делаются каждый день!

 

Скажите, а в каких случаях Вы красите на эластику? И почему не пользуете орцеин по Тенцеру-Унна, ведь он проще в приготовлении?

 

Кстати, планирую сделать, шутки ради, довольно эксклюзивную вещь - покрасить срезы печени и селезенки (точнее, всю кучу, которая будет в блоке), а также мазок крови "триацидною нейтрофильною смесью Эрлиха-Бионди-Гейденгайна" - самым старым гематологическим методом, который только можно найти. Именно с его помощью Эрлих (не Эдвин :(/>) когда-то разделил все зернистые лейкоциты на нейтрофилы, оксифилы и базофилы. Ни разу не видел ни в литературе, ни в сети - даже при поиске на латинице - ни одного цветного снимка с препаратов, окрашенных этим методом. Только в "Патологической анатомии" Никифорова (1905г.) есть черно-белая фотка с мазка крови. На каком-то форуме я как-то наткнулся на пост некого итальянца, который тоже хотел опробовать эту методику и искал протокол окраски (он, к слову, есть в Ромейсе). Он упоминал, что, будто бы, главная сложность метода - получить хорошую окраску ядер метиловым зеленым.

 

Баловство, конечно - но интересно, еще пацаном мечтал это сделать.

[Andrey]

Вот тут есть текст, где автор неспешно рассуждает об окраске Эрлиха-Бионди-Гейденгайна. Может быть пригодится.

[Ледигист]

Вейгерт на эластику - делаются каждый день!

Скажите, а в каких случаях Вы красите на эластику? И почему не пользуете орцеин по Тенцеру-Унна, ведь он проще в приготовлении?

 

У нас, кроме гистологического озорства, которое и мне присуще, в совокупностью с банальным женским любопытством (а чего из этого получится, если...) существует еще нормативный докУмент - Правила работы в отделении смэ гистологии, по которым ВСЕ детские легкие при дифференцировке мертво- и жоворождения я ОБЯЗАНА красить на эластику. По степени расправления элестических волокон можно якобы говорить о расправленности альвеол... Мура, конечно, тем более, что где-то я читала в свое время - окончательное формирование эластического каркаса легких заканчивается к 14 годам.

На эластику еще крашу все аневризмы всех сосудов, чаще аорту безусловно.

 

Что до предложенной методики - опять же пресловутые Правила - в них прописан Вейгерт, а вот попробовать - орцеин по Тенцеру-Унна - даже интересно стало...

Уважаемый Ciacona - киньте пропись и методику эту ленивой дамочке...ну шоб у Ромейса не искать, плизззззз :(/>

[Ледигист]

Было бы чем сфоткать, остальное - мелочь!

ЭТО и есть наша основная трудность....техническая НИЩЕТА. Более половины Украины еще в монокуляры смотрит! Когда я вижу онкогематологов с ученическими микроскопами у меня сердце сжимается от ужаса....

[Ciacona]

Уважаемый Ciacona - киньте пропись и методику эту ленивой дамочке...ну шоб у Ромейса не искать, плизззззз :(/>

 

Краска: Орсеин - 1г., Крепкая соляная кислота - 1 мл, Спирт 96% - 100 мл.

 

1. Окрашивают ядра (кармином или гематоксилином)

2. Помещают в раствор краски на 30-60 минут.

3. Дифференцируют 96% спиртом под контролем микроскопа 3-5 минут, до резкой окраски эластики.

4. Ксилол, бальзам.

 

Краску можно готовить также на 70% спирте, как будто тогда препараты демонстративнее. Но тогда нужно окрашивать в термостате при 37 градусах 2-3 часа и дифференцировку вести 1% раствором соляной кислоты в 70% спирте.

 

(пропись взята из Меркулова)

 

Было бы чем сфоткать, остальное - мелочь!

ЭТО и есть наша основная трудность....техническая НИЩЕТА. Более половины Украины еще в монокуляры смотрит! Когда я вижу онкогематологов с ученическими микроскопами у меня сердце сжимается от ужаса....

 

Мерзко, конечно. Хотя, на самом деле, "студенческий" микроскоп (не школьный!), если он новый, бинокуляр с широким полем зрения и незасранными окулярами и объективами - это не так уж плохо. Все мои фотки здесь сделаны именно с помощью такого домашнего микроскопа. Свой текуший материал (а у меня он на 50% состоит из опухолей кроветворной системы) я вполне могу просматривать на нем (забирая стекла домой).

 

Вот тут есть текст, где автор неспешно рассуждает об окраске Эрлиха-Бионди-Гейденгайна. Может быть пригодится.

 

Спасибо, интересно.

[Ледигист]

Мерзко, конечно. Хотя, на самом деле, "студенческий" микроскоп (не школьный!), если он новый, бинокуляр с широким полем зрения и незасранными окулярами и объективами - это не так уж плохо.

 

АГА...Счаззззззззззз

Допотопный микроскопчик, предназначенный для уроков общей биологии с увеличением в 56 раз, на который кто что может, тот то и вешает...кто бинокуляр, кто объективы от БМИ - 15 (за поллитра спирта стебнутые из другой лаборатории) 8(/> - давно устоявшаяся традиция. ...а центровку то на таком аппарате никто сделать и не пытается - это ж :pris:/> ... На малом увеличении че то нашел...а на 40 - переехал и пшшшшшшш. Так что достоверность результата в дроЖЖЖЖЬ и бросает. :(/>

 

Спасибо огромное за пропись окраски. Озадачу лаборантку. Губы надует...но сделает. Если че получится - сфоткаю.

[Edwin]

Красивые картинки, ничего не скажешь. А вот у нас явно намечается тенденция уменьшения количества используемых классических методов окраски. Даже химикаты перестали в отделении стоять. Они стареют, их выбрасывают после истечения срока годности, а новые не заказывают.

 

Идёт это из патанатомии. Там вообще наверное с пяток окрасок и осталось, остальное через иммунгистохимию гонят. На счёт этого невропатологи (это особые патанатомы для нервной ткани, не путать с клиническими врачами!) веселее. Я у них всякой пёстрой лабуды насмотрелся, аж глаза разбегались. Так вот у них считалось особым шиком покрасить на нечто эдакое, чего вообще никто не видел и не слышал. Там лаборантки, как алхимистки были. Красили просто на всё, на что прописи доставали. А склад химикатов занимал приличное место в лаборатории. Вот они, как дети, радовались на всякие новые окраски. Но я оценить не мог, базы не хватало для понимания.

 

Классические патанатомы, однако, почему-то очень скептически к этому относились и говорили, что невропатологам делать просто нечего, вот они со скуки и развлекаются. Вообще-то нагрузка на обычного патанатома была раза в 3 выше, чем на невропатолога при одинаковой зарплате! Вот они и грызлись слегка межсобой.

 

Помню какой-то банальный случай, то ли с рассеянным склерозом, то ли с синдромом Корсакова, мы красили срезы головного мозга каждый день по новому, новым способом, недели две. В общем, всё смотрели те же яйца, но в профиль. Но профессорша была очень игручая и любила всякие новые цвета до детского восторга. Я при разглядывании вместе с ней трёх клеток в течении нескольких часов на демонстрационном микроскопе, наблюдал за её действиями с препаратом вместе с молодым коллегой через учебные приставки к её микроскопу и вынужден был также громко восхищаться увиденным. На третий день я начал засыпать и перестал выказывать восхищения, так как от скуки просто зубы ломило. После каждой новой окраски мы обнаруживали массу нового доселе неизведанного и даже самой профессорше неведомого. Так как демонстрации проходили в библиотеке, то полагалось тут же начинать рыскать по многочисленным монографиям и пытаться вычитать, что же мы видим в этой новой окраске и как это можно привязать к нашему случаю. Литература вся была преимущетсвенно на английском с которым я на ВЫ и потому эти мучительные заседания с дискуссиями что бы это могло быть запомнились мне на всю жизнь. Через две недели я понял твёрдо и навсегда, что невропатолог это не для меня. Как можно было две недели обсасывать банальный случай, когда в обычной патанатомии мне до обеда надо было сдать, как минимум 10 новых случаев с различной патологией от аппендикса, до маммакарцином. А после обеда их все отдиктовать, вычитать, подписать и выставить в больничную сеть для клиницистов. А невропатологи с красочками развлекались обсасывая два случая в неделю.

 

С тех пор как-то осторожно стал к краскам относиться. Мой основной профессор-патанатом всегда шутливо говорил "хороший патанатом видит всё в ГЭ", остальное бирюльки :(/>

[Ледигист]

С тех пор как-то осторожно стал к краскам относиться. Мой основной профессор-патанатом всегда шутливо говорил "хороший патанатом видит всё в ГЭ", остальное бирюльки :(/>

 

А мой чуточку иначе - если вы ничего не видите на г/э нефиг иные краски переводить! 8(/>

И еще - если вы глянув 1-2 поля зрения легких пневмонию не видите - ее там нет!

И из той же оперы - глянув одним глазом на 3 лейкоцита в печени и мое предложение дорезать и чем-нибудь еще покрасить - не воруй минуты молодости у лаборантки - от этого еще никто не умер! :pris:/>

[Ciacona]

Идёт это из патанатомии. Там вообще наверное с пяток окрасок и осталось, остальное через иммунгистохимию гонят.

 

Мой основной профессор-патанатом всегда шутливо говорил "хороший патанатом видит всё в ГЭ", остальное бирюльки :(/>

 

Что тут скажешь - не так уж и далек от истины был Ваш профессор - при наличии иммуногистохимии (1. - денег на нее, 2 - годного материала, ибо большинство трупного считается совершенно негодным) прочие окраски в практической работе мало что могут добавить к старому доброму Г.-Э. Зато, когда ее нет - вот тут и вспоминают Фута (чтобы по характеру стромы анапластический рак от лимфомы отличить), и Браше (для патологии лимфоузлов), и ШИК при мембранозной гломерулопатии и т.д.

 

Зато иммуногистохимия нудная и некрасивая - монотонная рыжая или красная окраска на все случаи 8(/> И артефактов там - мама не горюй!

 

Понимаете ли, Эдвин, для меня морфология - это прежде всего красота, потому да, красивые препараты доставляют удовольствие и создают (в том числе) некую мотивацию к работе. Иначе б я давно ушел в молекулярную иммунологию.

 

Ну, а случай с невропатологами - это, конечно, клиника, что уж там. Надо разделять котлеты от мух, в смысле, работу и "хобби".

[Edwin]

Иммунгистохимия действительно скучная процедура. Либо фигвам, либо невооружённым глазом уже видно, что краска прошла и всё коричневое. Морфологии, собственно, и нет никакой.

 

У меня была по молодости (и глупости) идея создать свою иммунгистохимическую лабораторию в СМЭ. Пошёл на стажировку к патанатомам в иммунгистохимическую лабораторию опыта понабраться. Но достаточно быстро понял, что это вам не :rules:/> (-ки) у морковки откусывать. Оценивать срез легко, а вот делать без артефактов это очень мудрёно. Лаборатория должна как часы работать и особый нюх, т.е. гигантский опыт иметь надо. Помню, что зав. лабораторией никакие срезы не выдавал врачам на диагностику прежде чем сам со своими лаборантами каждый(!) срез на демонстрационном микроскопе не просмотрит. При этом, частенько, при малейшем сомнении, срезы заново перекрашивались. Теперь этот зав, также профессором стал, но также все срезы в лаборатории продолжает лично контроллировать.

 

Он мне на пальцах и объяснил, что вся эта идея со своей лабораторий в СМЭ из-за большой опасности возникновения артефактов не есть хорошо. Я, естественно, лично прообирочки таскал, красил, в скороварке варил и пробовал, пробовал. Интересно было, но периодически при одних и тех же процедурах краска не шла. Всё делал одинаково, а краска не шла. Просто, как заколдовано всё было. В общем помучился я и понял, что этим надо серьёзно заниматься и каждый день. А откуда у СМЭ такая возможность и столько времени? Так что теперь носим наши срезы на окраску в патанатомию. Да и дешевле так получается.

[Ciacona]

Иммунгистохимия действительно скучная процедура. Либо фигвам, либо невооружённым глазом уже видно, что краска прошла и всё коричневое. Морфологии, собственно, и нет никакой.

 

У меня была по молодости (и глупости) идея создать свою иммунгистохимическую лабораторию в СМЭ. Пошёл на стажировку к Всё делал одинаково, а краска не шла. Просто, как заколдовано всё было. В общем помучился я и понял, что этим надо серьёзно заниматься и каждый день. А откуда у СМЭ такая возможность и столько времени? Так что теперь носим наши срезы на окраску в патанатомию. Да и дешевле так получается.

 

Нууу, Вы даете... Как это нет там морфологии?!! Как раз наоборот - без детального знания морфологии в иммуногисто не стоит и соваться, поскольку там ориентироваться придется по блеклым препаратам, на которых лишь подкрашены ядра гематоксилином. Простой пример. Красим, допустим, регионарный лимфоузел для поиска микрометастазов рака панцитокератином (это такие антитела, которые с любым эпителием прореагируют). И что можем получить? - Вполне заметное прокрашивание отдельных клеток в мозговых тяжах. Метастаз рака! Ан нет. Плазмациты-то, оказывается, в некоторых случаях тоже с панцитокератином дают реакцию! И тут-то и нужно по морфологии ориентироваться, "спицы колеса" в ядре и все такое.

И вообще, иммуногистохимия - это, прежде всего, целая система критериев учета адекватной реакции, не всякая рыжета там принимается, так что о невооруженном глазе и речи не может быть. Ядерное окрашивание, цитоплазматическое, мембранное... Не дай Бог, скажем, если антитело, для которого характерна только ядерная реакция, даст еще и мембранное окрашивание - все, препарат выкидывается, даже если ядерная окраска есть.

 

А материал у Вас какой был? Трупный, надо полагать? Вообще у наших патологов считается, что на трупном материале иммуногистохимия - гиблое дело. Сам не пробовал, не знаю, но, например, то, что недельного лежания в формалине достаточно, чтобы угробить материал - это точно. Иммуногистохимическое окрашивание - уравнение со многими неизвестными, конечно, но свежесть и адекватное качество фиксации материала - условие №1.