Перейти к содержимому

Судебно-медицинский форум forens.ru

Forensic medical forum

Судебно-медицинский форум

Формалиновый пигмент


Сообщений в теме: 6

#1 Boroda Отправлено 06 Декабрь 2007 - 19:33

  • tеаm
  • 3 821 сообщений
Уважаемые коллеги!

Вот посмотрите на нашу беду. Формалиновые пигменты замусоривают срезы.
Прикрепленное изображение: Formalin_Pigment.jpg
Мы уже и формалин с буфером пытались применять и отмывать, но толку мало. Селезёнка стандартно с пигментом получается. Не только мешает сомтреть, но и фотографировать.

Есть у вас такая проблема? Как с ней бороться?

реклама

#2 dospan Отправлено 06 Декабрь 2007 - 21:13

  • смэ
  • 526 сообщений
Уважаемый Борода, увы, это извечная проблема гистологической лаборатории...
Нашел по данной проблеме следующее:
При фиксации формалином, особенно кислым, возможно появление в срезах темно-коричневого пигмента в виде зернышек или глыбок (результат реакции формалина с гемоглобином ткани). Пигмент удаляют, помещая срезы на 15—20 мин в 1—5 % раствор аммиака или 70 % спирт. После промывания водой препарат можно окрашивать. Хорошо удаляется пигмент в растворе 1 % гидроксида калия в
80 % спирте (1:25): после 10-минутной экспозиции препарат промывают в проточной воде в течение 5 мин.


Формалин. Основным, широко применяемым фиксатором служит формалин, представляющий собой 40% раствор формальдегида. Формальдегид – это газ, растворимый в воде до концентрации 40% по массе, каким он и поступает в продажу под названием «Формалин». В гистологической практике используют 10% раствор формалина, что соответствует 4% формальдегиду. Из формальдегида готовят нейтральный (забуференный до рН 7,0) 10—12% формалин. Для этого в банку с 40% формалином засыпают карбонат кальция или магния либо смесь этих солей — доломит из расчета 100 г на 1 л формалина. Для получения 10 % нейтрального формалина через 24 ч к 1 части 40% нейтрального формалина добавляют 9 частей водопроводной воды. Продолжительность фиксации 24— 48 ч при 20°С
В водных незабуференных растворах формальдегид со временем превращается в муравьиную ки-слоту, метиловый спирт и ацетон, которые ухудшают качество фиксации, как и выпадение белого осадка параформальдегида.
В результате точную концентрацию формальдегида в растворах формалина установить не представляется возможным. Если на дне банки с 40 % формалином образовался осадок белого цвета (параформальдегид), то его можно растворить, подогрев до 70—80° С (в вытяжном шкафу!), и использовать для фиксации. Очищенный коммерческий параформальдегид применяют как составную часть многих фиксаторов для гистохимических и электрон-но-микроскопических исследований.
Фиксатор может показывать себя не с лучшей стороны из-за примесей, в основном метанола(до16%).

Для этого существуют методы приготовления фиксатора, свободного от метанола

4% ф-д по Гайеру
2 г параформальдегида + 50мл 0,1М фосфатного буфера(рН 7,4-7,6) нагревают до 70с до просветления раствора, помешивают, охлаждают и фильтруют. Его рН 7,3-7,5.

40% ф-д по Глауерт
готовят 40% параформальдегид (40г порошка формальдегида + 100 мл дистиллированной воды при нагревании до 65С, перемешивая) + несколько капель 40%гидроксида натрия до просветления раствора.

Солевой формол.
Нейтральный 40% формалин 100 мл
Хлорид натрия 8,5 г
Водопроводная вода 900 мл
Продолжительность фиксации 48 ч при 20° С с последующей промывкой в проточной воде в течение 6—12 ч.

Универсальным фиксатором, пригодным для гистологических и большинства гистохимических исследований, является нейтральный формалин по Лилли).

А. 100 мл 40 % формалина + 900 мл дистиллированной воды.
Б. 4 г дигидроортофосфата натрия моногидрата (однозамещенного фосфата натрия).
В. 6,5 г гидроортофосфата натрия (двузамещенного фосфата натрия).

Фиксатор Лилли для кислых гликозаминогликанов
1.Нитрат свинца 8гр
2.40% раствор формальдегида 10мл
3.вода 10мл
4.этанол 80мл
продолжительность фиксации 24 часа при комнатной температуре (при 4С – 2-3дня, 10-14 дней при –25С).

Фиксатор Жандра для гликогена
1.Пикриновая кислота, насыщенная в 96% спирте 85 частей
2.Раствор формальдегида 40% 10 частей
3.Ледяная уксусная кислота 5 частей

Сообщение отредактировал dospan: 06 Декабрь 2007 - 21:16


#3 Andrey Отправлено 07 Декабрь 2007 - 10:29

    хун вен цвинь

  • смэ
  • 6 839 сообщений

Цитата

Есть у вас такая проблема? Как с ней бороться?

У нас нет. Может быть потому, что применяется специальный формалин со специальным буфером к нему.
Поставляется в канистрах: 1 канистра формалина + 1 канистра фосфатного буфера. Считать ничего не надо. Просто содержимое этих канистр выливается в воду и последняя доливается до метки.
Т.е. этот набор просто исключает какое-либо экспериментирование, равно как использование незабуференного формалина.

Там где применялся кислый и неизвестно какой формалин такая проблема была. Применение буфера и свежего формалина как правило ее снимало.

Цитата

Мы уже и формалин с буфером пытались применять...

В свете сказанного это смущает. Мож чего не так сделали? Проверьте прописи или возьмите что-то типа описанного выше готового набора.

#4 Гость_TMA_lad_* Отправлено 07 Декабрь 2007 - 20:00

  • Гости
Уважаемый Boroda,
Еще одной из причин может являться нейтрализация формалина карбонатом кальция.

#5 Boroda Отправлено 07 Декабрь 2007 - 20:57

  • tеаm
  • 3 821 сообщений
Уважаемый коллеги!
Спасибо за помощь! Мы ранее покупали обычный дешёвый формалин канистрами в высоких концентрациях. Потом я решил дорогой покупать. Пришёл представитель с фирмы и принёс две канистры забуференного готового формалина для испытаний. Раза в два дороже получилось, правда растворы готовые, даже разводить водой ничего не надо.

Все растворы поменяли, прогнали с десяток случаев, но толку мало. Где крови много, там опять пигмент виден. Послал я эту фирму..., договор ещё не заключили и перешёл опять на дешёвый формалин. Прогнали 10 случаев и дали коллегам посмотреть для сравнения. Разницы вообще никакой не видно. Что забуференный, что обычный формалин дают немного формалиновый пигмент в некоторых органах, например в селезёнке. Теперь прошу лаборантку отмывать пигмент если заметит. Вроде немного стабилизировалось опять всё, но пигмент всё равно периодически вылазит.

Зло меня берёт, не могу понять где "собака зарыта".

#6 vulture Отправлено 25 Февраль 2008 - 21:38

  • смэ
  • 3 016 сообщений
Вот как бывает. Полез за ссылкой для ответа на вопрос Ледигист, а нашел ответ для ответа в другую тему :wow:/>

"... Удаление формалинового пигмента. Кристаллы темно-коричневого формалинового пигмента периодически откладываются после фиксации мягких тканей с кровоизлияниями в кислом растворе формалина - и редко обнаруживаются при использовании нейтрального или забуференного формалина. Они могут быть удалены на этапе окраски путем использования насыщенного раствора пикриновой кислоты в этиловом спирте. Приготовьте насыщенный раствор пикриновой кислоты в 100%-ном этаноле (или промышенном метиловом спирте). Выдерживайте обезжиренные кусочки тканей в течение необходимого периода времени (от 15 минут до полусуток), затем тщательно промойте водопроводной водой..."

Цит. по "Neuropathology techniques. T.P. Dawson, J.W. Neal, L. Llewellyn, C. Thomas. Arnold, 2003". p. 118".

Прикрепленные изображения

  • Прикрепленное изображение: P2250207__.JPG


#7 Гость_DrPain_* Отправлено 30 Январь 2012 - 20:50

  • Гости
В старину опытные люди в формалин мел порошковый добавляли 100 г на литр(Меркулов) и никаких пигментов :rules:/> ;)/>



Сообщество русскоговорящих судебно-медицинских экспертов
Community of Russian-speaking forensic medical experts
© 2006-2017 Forens.ru