Сообщений в теме: 19

[Herbert West]

Уважаемые работники судебной медицины, выручайте!
Коллегой я назваться не могу, ибо сам не судебный медик, но занимаюсь гистологией в научных целях.
Вашему вниманию предлагаю небольшую загадку, которая для вас может оказаться не такой уж и загадочной, но мне, как человеку не очень опытному, не удалось пока найти ответа, который бы меня удовлетворил.
Ниже на картинке вы можете увидеть гистологический срез кишечника крысы.
Загадочным в нём являются базофильные крупные округлые образования в эпителии слизистой оболочки.
Они несколько похожи на бокаловидные клетки, но возникает вопрос: откуда такая интенсивная базофильностьи такие крупные размеры. Я такого никогда не наблюдал, быть может, вы встречали что-то подобное или читали об этом.
Окраска гематоксилин-эозином. Фиксатор – нейтральный формалин.

Буквой А на фотографии отмечены именно те самые непонятные базофильные включения.
 rat1.jpg (204,08К)
Количество загрузок:: 20
 rat2.jpg (152,45К)
Количество загрузок:: 17

[dospan]

Herbert West (1.4.2011, 18:37) писал:

Загадочным в нём являются базофильные крупные округлые образования в эпителии слизистой оболочки.

Ядра клеток

[Herbert West]

Эммм, тогда что это за клетки?
Макрофаги? Но они, на сколько я знаю, в эпителий не влезают. Да и ядра у них другие, а эти крупные какие-то.
Я не отрицаю, что это могут быть клетки, но вопрос в том, какие это клетки.
Выбор-то небольшой: эпителий, макрофаги, тучные, клетки Панета.
Ни на одну из перечисленных клеток, та штука не похожа.

[Dissector]

Надо понимать - увиденные округлые образования это цитоплазматические включения (ядра отчетливо видны в базальных отделах эпителия и располагаются, относительно, на одном уровне). Интенсивность базофилии «образований – включений» меньше по сравнению с ядрами, (и, тем более, с лимфоцитами), это видно на большом увеличении; а дисперсность образований относительно рыхлая. Окраска известная - Гематоксилин-Эозин, но ядра лимфоцитов – почти черные (тут же повторюсь – включение гораздо светлее).
Может, подобный оттенок включений связан с «особенным» гематоксилином, ведь существуют различные рецептуры гематоксилинов.

Можно предположить, что подобные цитоплазматические включение связаны с особенностями кишечного пищеварения и являются, например, секретом бокаловидных клеток. При окраске Г-Э природу включений можно лишь предполагать. Для верификации включений нужно провести гистохимические реакции (для начала - окраски на слизь).

[Vil]

А чем крысу кормили? Может сама чего вкусного базофильного раздобыла?

[ramzes]

Возможно какая-то местная реакция гиперчувствительности немедленного типа Гистохимию интересно бы сделать. Это исследование проводилось вместе с другими сравинительными образцами? Скакой целью? Как крысы умерщвлялись? Дайте больше исходных данных...

Сообщение отредактировал ramzes: 01 Апрель 2011 - 19:20

[Dissector]

ramzes (1.4.2011, 22:14) писал:

Возможно какая-то местная реакция гиперчувствительности немедленного типа

Почему? На основании чего, ramzes, предполагаете?

[Herbert West]

ОК!
Добрались до сути.
Крыс кормили препаратами железа (мальтофером) . Это не исследование на токсичность, давали терапевтические дозы, поэтому отравления, теоретически, быть не должно. При вскрытии кишечника, от содержимого шёл резкий кислый запах, хотя видимых признаков воспаления не было обнаружено.
Заподозрили мы, что усилились процессы брожения, типа бродильная диспепсия.
Возможно, что видим мы гипертрофированные бокаловидные клетки с возможным изменением свойств продуцируемой слизи.
В группе интактных животных таких изменений в строении слизистой нет. Тогда как в опытной группе у всех животных без исключения наблюдается такая картина.
Но хоть убейте, перерыл весь интернет и кучу книг - ничего похожего не встретил.
О чём говорит базофилия бокаловидных клеток? Если это, конечно, они.

Да, спасибо за совет, на слизь непременно покрашу.

[ramzes]

Dissector (1.4.2011, 23:36) писал:

Почему? На основании чего, ramzes, предполагаете?

Базофилия насторожила... Это, конечно, не патогномонично для аллергий, но довольно часто наблюдаемо.
И все-таки какова цель исследования? Не создание же "крысы из нержавеющей стали" по Г. Гаррисону.

Сообщение отредактировал ramzes: 01 Апрель 2011 - 20:14

[Edwin]

Вы для полноты картины и на железо покрасьте. Чем чёрт не шутит...

[ramzes]

Edwin (2.4.2011, 2:46) писал:

Вы для полноты картины и на железо покрасьте. Чем чёрт не шутит...

В рамках проводимого эксперимента окраска на железо должна быть просто предусмотрена методикой исследования. Иначе не вижу смысла шпиговать зверушек "железками"

[Herbert West]

Да, окраска на железо предусмотрена. Просто это первые результаты. И железо, и слизь теперь уже на следующей неделе посмотрим.
Параллельно идёт опыт по парантеральному введению железа, в органах развивается жуткий гемосидероз, но крысы, как ни странно, неплохо себя чувствуют.
Вот, к примеру, печень (гематоксилин-эозин и по Перлсу).

Фото 1.
А - центральная вена печёночной дольки, Б - пигмент, вероятнее всего это гемосидерин,
В - расширенные просветы синусных сосудов печёночной дольки.
 rat3.jpg (116,58К)
Количество загрузок:: 15

Фото 2.
А - зёрна того самого пигмента, что указан на прошлом фото буквой Б, при окраске по Перлсу, красятся в синий цвет; кроме этого цитоплазма гепатоцитов тоже окрасилась в синий цвет, что говорит о высокой концентрации железа в клетках.
 rat4.jpg (153,72К)
Количество загрузок:: 13

[ТМВ]

Уважаемые и дорогие корифеи-гистологи!

А нельзя ли специально для некоторых танатологов, кои лохи в гистологии (меня, например) рисовать к вашим чудесным картинкам какие-нить пояснительные надписи со стрелочками, чтобы дивясь на это красивейшее многоцветие, мы ещё заодно и слегка обучались чему-то? Полагаю, не так трудно фотошопно ткнуть стрелкой в макрофаг, бокаловидность или базофилию, вам ведь это плёвое дело, а нам полезно и приятно, а?

[Herbert West]

Немного поправил.
Указал, на мой взгляд, самое необходимое.
Если чего-то не хватает, я поправлю ещё.

[Ciacona]

Господа-коллеги и лично коллега-автор темы!

Как патолог-экспериментатор, пересмотревший тысячи образцов кишечника мышей и крыс, покрашенных по всякому-разному, говорю: не парьтесь. Это - классические, супертипичные бокаловидные клетки. Просто некоторые гематоксилины - особенно, если это гематоксилин Майера, купленный в Биовитруме - быстро перезревают и начинают их бешено красить.
Если не верите - сделайте ШИК - и сразу яркая краснота этих "аномальных" клеток вас убедит в моей правоте. Не исключено, конечно, что в Вашем случае "гематоксилинофилия" (при окраске гематоксилином говорить о базофилии, на самом деле, не всегда корректно, так как механизм окраски связан с главным образом с образованием металлических лаков, а не с кислотно-основными взаимодействиями, в отличие например, от азур-эозина) слизи действительно как-то связана с введением железа, но я такую дрянь видел именно тогда, когда, не имея желания приготовить гематоксилин своими руками, воспользовался биовитрумовским пробником. В любом случае - обратите внимание, не в разных ли растворах красили препараты опытной и контрольной группы и если в разных - покрасьте их одними и теми же реактивами в одинаковых режимах.
Кстати, забытый как-то раз в свежем гематоксилине Караччи на целые сутки срез слепой кишки дал точно такую же картину окраски слизи в бокаловидных элементах.

P.S. Еще раз внимательно посмотрел на Ваш снимок. Срез явно толстоват - просите лаборанта резать по 4 микрона! И - да, перекрашен гематоксилином (обратите внимание на "нездоровый" грязный фиолетовый оттенок цитоплазмы энтероцитов). Пользуйтесь прописью Караччи, она проста и не дает такой грязной перекраски.

[ТМВ]

Гигантский респект коллеге Herbert West за оперативность и несомненную пользу (во всяком случае - для меня) от стрелок и пояснительных надписей.

Дорогие гистологи! Полагаю, отныне ни для кого не составит особого труда делать подобное.

Еще раз спасибо, уважаемый коллега!

[Herbert West]

Уважаемый, Ciacona, я с вашим мнением полностью согласен.
Просто появились сомнения, потому что несколько человек из нашей лаборатории высказали мнение, что это могут быть макрофаги или тучные клетки. Я хоть и сомневался в правильности их предположения, ибо никак они не похожи на эти клетки, но решил всё-таки перепроверить и спросить мнение ещё нескольких специалистов, в том числе и в интернете.
Безусловно, на мои сомнения повлиял ещё тот факт, что гематоксилин для окраски срезов использовался один и тот же, как для контрольной, так и для опытной группы животных. Гематоксилин готовим сами, покупной не очень понравился. Наш гематоксилин был уже неоднократно проверен на других срезах и не давал такого эффекта.
Надеюсь, гистохимия всё расставит по местам. На этой неделе сделаю.

Уважаемый ТМВ, рад, что сумел хоть немного принести пользы на этом форуме. Пожалуйста!

Как только будут готовы результаты гистохимии (по крайней мере, окрашу на слизь и на железо), выложу их в этой теме.
Всем спасибо за участие в обсуждении!

[Herbert West]

Немного задержался с новостями, но всё же выкладываю результаты окраски на слизь.
Как и ожидалось, непонятные включения синего цвета оказались обыкновенными бокаловидными клетками.
Для выявления слизи использовали метод окраски альциановым синим.
На фотографии бокаловидные клетки ярко синего цвета (помечены цифрой 1).
 389807.jpg (67,57К)
Количество загрузок:: 15
 389811.jpg (65,81К)
Количество загрузок:: 15

[qwer]

Уважаемые патологи-экспериментаторы, спасибо за визиты на наш форум.
Заходите, общайтесь между собой и с нами.
Мы с удовольствием будем вас принимать и сами чему-то у вас учиться.
Если вас собереться немалая компания и обсуждения примут оживленный характер, можем сделать вам специальный раздел форума.

[Herbert West]

Спасибо, уважаемые, мне даже неловко стало, ведь ничего особенного я и не сделал.
Если будет ещё что-нибудь интересное, то обязательно выложу.