Сообщений в теме: 13

[Andrey]

Цель такой фиксации – детальное исследование мозга. Только на фиксированном мозге можно сделать достаточно тонкие и аккуратные разрезы.
Исключение – поиск аневризм. Таковой должен быть выполнен до фиксации.

1. Извлекаем головной мозг, помешаем в подходящий контейнер.



2. Подводим лигатуру соответствующей длины под основную артерию. В качестве лигатуры используется обычная нить для зашивания трупов.



3. Завязываем узел, но не затягиваем его. Такой узел предохраняет мозг от смещения в формалиновом контейнере.



4. На один из концов лигатуры прикрепляем идентификационный номер.
В качестве бирки для номера может использоваться обычная клеенка и любой другой материал. В данном случае использована пластиковая крышка на обратной стороне которой пишутся номер вскрытия, дата и инициалы доктора. Следует быть осторожным при использовании бумаги, которая может намокнуть при случайном попадании в формалин.



5. Аккуратно помещаем мозг в контейнер с формалином. Концы лигатуры располагаем по обе стороны от контейнера.



6. Накрываем контейнер крышкой. Натягиваем лигатуру, так чтобы мозг оказался в подвешенном состоянии и фиксируем ее зажимом.


При неимении специального контейнера, таковой легко заменяется обычным пластиковым ведром с крышкой.
В этом случае концы лигатуры привязываются к проушинам ручки ведра или закрепляются любым другим способом.

Для фиксации подходит 5% формалин на фосфатном буфере. Желательно время от времени менять формалин.

Классически смена производится на следующий день, затем дважды на каждый 3-й день, затем на 7-й. Время фиксации – две недели.

Практически формалин достаточно сменить через пару дней в случае его сильной загрязненности и примерно через неделю в случае, если вырезка откладывается.

Примечание.
Полные версии картинок приведены, как обычно, в галерее >>>
Напоминаю, что при клике на картинку в галерее открывается ее копия оригинального размера.

[Boroda]

Спасибо за сообщение. Мы также делаем. Очень интересует техника последующей вырезки и стандартные зоны забора материала (Hyppocampus, N. dentatus...???). Так что ждём продолжения.

[Vil]

Если использовать ведро, то вместо лигатуры на базилярную артерию для "подвешивания" в растворе можно пользоваться марлей в виде "узелка", в который и помещается мозг. Пользовал такой метод раз или два, когда работал в районе и для консультации с "зубрами" доставлял мозг в бюро.
А если вместо, предложенного Андреем контейнера, использовать обрезанную 3-х литровую банку, то еще и литров 10 формалина для других нужд сэкономить можно .

[Andrey]

Цитата

...можно пользоваться марлей...

Мы используем марлю только если удалены сосуды. В этом случае все тоже самое, только мозг подвешивается за узел марли. Но сама по себе марля может немного деформировать мозг, особенно его рельеф. Поэтому стараемся использовать ее только в исключительных случаях.

Др. Гюнтер фон Хагенс (продвинувший пластинацию в люди) использовал обычную канцелярскую скрепку в пластиковой оболочке. Длинный конец скрепки немного отгибался, она просовывалась под базилярную артерию и этот конец загибался обратно. Далее уже за нее цеплялась лигатура.

Цитата

Очень интересует техника последующей вырезки и стандартные зоны забора материала

Обычно мозг режется поперечно с шагом, примерно 1 см или меньше. Срезы последовательно раскладываются в виде рядов.
На гистологию обычно забирается все, что привлекло внимание исследователя и то что требуется для тех или иных научных разработок.

Мозг - вешь не очень частая в нашей практике. Материал поступает только с больничных вскрытий или по специальному завещанию умерщих, потому стараются брать максимум.

[vulture]

Нашел любопытную методику ускоренной фиксации головного мозга в формалиновом растворе:
1. Выделяем головной мозг как обычно.
2. Помещаем в пластиковое ведро с 10% формалином, так, чтобымозг был полностью покрыт раствором.
3. Накрываем крышкой (свободно).
4. Помещаем в обычную бытовую микрофолновку.
5. "Разогреваем" (reheat) 20 мин.
6. Еще выдерживаемы 20 мин. при самом "слабом" режиме (low) .
7/ Оставляем охладиться в течение еще 20 мин.
8. Промываем в холодной воде.
9. Исследуем.

Взято из Forensic Neuropathology (Ed. by Helen L. Whitwell, 2005). Та же автор рекомендует обычную (без нагревания) фиксацию головного мозга как минимум в течение 3-4 недель, что для нас абсолютно неприемлемо по срокам производства экспертиз. Ну а исследовать ГМ через часок фиксации в микроволновки - почему и нет?
Кто-нить пользовался такой методой?

[vulture]

Konst&INN (24.11.2007, 19:03) писал:

Где бы ещё микроволновну найти, чтобы ведро помещалось...

Костик, не ёрничай. В оригинале было bucket. Хошь - переведи его по-другому. Емкость с ГМ в стандартную микроволновку вполне влезает. Уже прикинул . Просто эта метода - реальная возможность нашим экспертам приобщиться к зарубежному опыту исследования ГМ после предварительной фиксации. Патанатомы, кстать, из НИИ неврологии РАМН это уже давно делают. Но у них нет таких жестких сроков: месяц - конец экспертизы. А для СМЭ даже две недели предварительной фиксации ГМ критично. 1 час - вполне возможно! Об чём и речь.

[for-for]

Микроволновка стандартная - это на 20 литров? А мощность 800 W?
Разогрев - это какой процент мощности?
Тот же вопрос по самому слабому режиму.

Посмотрел несколько микроволновок, нет у них таких режимов.
А вот режим оттаивания наверное подойдет. Если установить массу продукта 1,5 - 2 кг (у разных печек), то время работы как раз около 20 минут.
При этом продукт должен оставаться сырым.

Может эту методику применить и для всей гистологии, а то бывают летом случаи, когда кусков много в малом объеме посуды и за сутки подгнивают.

[vulture]

for-for (24.11.2007, 21:11) писал:

Разогрев - это какой процент мощности?
Тот же вопрос по самому слабому режиму.
Может эту методику применить и для всей гистологии, а то бывают летом случаи, когда кусков много в малом объеме посуды и за сутки подгнивают.

Те же вопросы у меня возникли, потому что в руководстве об этом данных нет. Приходилось видеть микроволновки, в которых все режимы обозначались значками, как "размораживание", "слабо", "сильно".
У той, что мы используем сейчас для обычных продуктов - вообще одни цифры. Поэтому приходится догадываться.
Для гистологии методика вряд ли применима. Там свои термостаты имеются. Эт вопрос не для них.

[Andrey]

В старых руководствах по гистологии встречаются методики быстрой фиксации. В старых русскоязычных сборниках научных работ таких методик как блох... правда тогда еще не было микроволновок...

Теперь новый виток, с использованием "современных" технологий... Другими словами, кто-то обновил себе микроволновку, а старую хозяйственно пустил в дело.

Сарказм объясняется тем, что как те старые многочисленные методики, так и, скорее всего, новые, микроволновые, останутся на страницах журналов. Хорошо, если я ошибаюсь, но что-то подсказывает мне, что не очень.

Проблема фиксации тканей примерно как проблема изучения иностранных языков. Есть ускоренные курсы, но нет ускорено выучивших язык и хорошо владеющих им. Вы можете учить язык ускоренно, но результат - корявое владение парой десятков фраз и все.

Так же и ткани - вы можете их фиксировать ускоренно, но плата будет в виде корявостей и артефактов на гистологии. Это уж как водится.

[vulture]

А вот не надо смешивать Божий дар с яичницей , т.е. ускоренную фиксацию головного мозга, чтоб его "прихватило" таким образом, чтобы было удобно рассекать (вспоминаю случаи исследования ГМ после продолжительной комы - между пальцев расползался), фиксацию материала для гистологического исследования и спиртовую проводку гист. материала.

Гист. материал фиксируется в течение 1-2 суток. Мы вырезаем кусочки потоньше, чтобы потом не дорезать. Тут никакие сроки не напрягают.

Ускоренную спиртово-ацетоновую проводку материала некоторое время использовали, но потом отказались. Много артефактов, к тому же непрогнозиремых: могут быть, а могут не быть. Трудно подстроиться. Сейчас "проводим" традиционно.

Что касается ГМ, непонятно, какие тут могут быть артефакты?? Важно, чтобы его было легче исследовать. И всё!
И к тому же идея обновить микроволновку оч даже своевременная. Наша уже облупилась .

[Andrey]

Вот именно, яичница и важнее и вкуснее.

С самого начала топика речь идет о фиксации головного мозга для его комплексного исследования, которое включает гистологию. Тут трудно сказать, что важнее макро или микро, но, однозначно, оба существенны.

Цитата

какие тут могут быть артефакты?

А какой смысл фиксировать мозг, затем его исследовать, если в этот момент нельзя взять материал на гистологию? И на каком этапе, в таком случае, эту гистологию брать?

Есть подозрение (изложенное в моем посту №23), что после такой микроволновочной фиксации для гистологии мало что останется.

[Boroda]

Я когда в патанатомии работал, то у нас сухожаровой шкаф имелся с качалкой внутри, которая мензурки и банки с формалином постоянно раскачивала. Температура что-то в районе 50 градусов была, в общем ещё не обжигала если пальцем в мензурку залезали. Использовали, да и сейчас используют, исключительно для мелких объектов, биопсий, которые фиксировали 1-2 часа и запускали в спирты. Большие объекты так не фиксировали из-за того, что они быстро прогревались и начинали гнить внутри. Скорость проникновения формалина внутрь объекта не достаточно для того, чтобы гнилосные процессы внутри остановить. Варить не хотелось, а просто подогрев до 40 градусов значительно ускорял гниение.

Так что с головным мозгом берут меня сильные сомнения... Особо с нашими объектами, где всё часто подгнившее. Так что я за классические способы фиксации.

Микроволновок, кстати, в патанатомии полно было, так как они при иммунгистохимии используются (срезы припекают до нанесения антител), но в классической лаборатории их не использовали.

[vladex]

Где описана методика?

[бело ус]

В тайне от своих регистраторов и не предупредив гистологов попробовал фиксировать в микроволновке. Как сказали гистологи, что за полости в толщине тканей. Так что я побовати ускорить процес больше не буду. Правда может попробовать в режиме "разморозки". Только в нашей такого режима нет. Может попробуйте сами и поделитесь мнениями.