Уважаемый Борода, увы, это извечная проблема гистологической лаборатории...
Нашел по данной проблеме следующее:
При фиксации формалином, особенно кислым, возможно появление в срезах темно-коричневого пигмента в виде зернышек или глыбок (результат реакции формалина с гемоглобином ткани). Пигмент удаляют, помещая срезы на 15—20 мин в 1—5 % раствор аммиака или 70 % спирт. После промывания водой препарат можно окрашивать. Хорошо удаляется пигмент в растворе 1 % гидроксида калия в
80 % спирте (1:25): после 10-минутной экспозиции препарат промывают в проточной воде в течение 5 мин.
Формалин. Основным, широко применяемым фиксатором служит формалин, представляющий собой 40% раствор формальдегида. Формальдегид – это газ, растворимый в воде до концентрации 40% по массе, каким он и поступает в продажу под названием «Формалин». В гистологической практике используют 10% раствор формалина, что соответствует 4% формальдегиду. Из формальдегида готовят нейтральный (забуференный до рН 7,0) 10—12% формалин. Для этого в банку с 40% формалином засыпают карбонат кальция или магния либо смесь этих солей — доломит из расчета 100 г на 1 л формалина. Для получения 10 % нейтрального формалина через 24 ч к 1 части 40% нейтрального формалина добавляют 9 частей водопроводной воды. Продолжительность фиксации 24— 48 ч при 20°С
В водных незабуференных растворах формальдегид со временем превращается в муравьиную ки-слоту, метиловый спирт и ацетон, которые ухудшают качество фиксации, как и выпадение белого осадка параформальдегида.
В результате точную концентрацию формальдегида в растворах формалина установить не представляется возможным. Если на дне банки с 40 % формалином образовался осадок белого цвета (параформальдегид), то его можно растворить, подогрев до 70—80° С (в вытяжном шкафу!), и использовать для фиксации. Очищенный коммерческий параформальдегид применяют как составную часть многих фиксаторов для гистохимических и электрон-но-микроскопических исследований.
Фиксатор может показывать себя не с лучшей стороны из-за примесей, в основном метанола(до16%).
Для этого существуют методы приготовления фиксатора, свободного от метанола
4% ф-д по Гайеру
2 г параформальдегида + 50мл 0,1М фосфатного буфера(рН 7,4-7,6) нагревают до 70с до просветления раствора, помешивают, охлаждают и фильтруют. Его рН 7,3-7,5.
40% ф-д по Глауерт
готовят 40% параформальдегид (40г порошка формальдегида + 100 мл дистиллированной воды при нагревании до 65С, перемешивая) + несколько капель 40%гидроксида натрия до просветления раствора.
Солевой формол.
Нейтральный 40% формалин 100 мл
Хлорид натрия 8,5 г
Водопроводная вода 900 мл
Продолжительность фиксации 48 ч при 20° С с последующей промывкой в проточной воде в течение 6—12 ч.
Универсальным фиксатором, пригодным для гистологических и большинства гистохимических исследований, является нейтральный формалин по Лилли).
А. 100 мл 40 % формалина + 900 мл дистиллированной воды.
Б. 4 г дигидроортофосфата натрия моногидрата (однозамещенного фосфата натрия).
В. 6,5 г гидроортофосфата натрия (двузамещенного фосфата натрия).
Фиксатор Лилли для кислых гликозаминогликанов
1.Нитрат свинца 8гр
2.40% раствор формальдегида 10мл
3.вода 10мл
4.этанол 80мл
продолжительность фиксации 24 часа при комнатной температуре (при 4С – 2-3дня, 10-14 дней при –25С).
Фиксатор Жандра для гликогена
1.Пикриновая кислота, насыщенная в 96% спирте 85 частей
2.Раствор формальдегида 40% 10 частей
3.Ледяная уксусная кислота 5 частей
Сообщение отредактировал dospan: 06 Декабрь 2007 - 19:16
1
Formalin_Pigment.jpg (211,82К)
